LB agar plate
- Transformation 된 E.coli를 배양하여 single-colony를 얻기위함이다.
1. 1L 삼각 플라스크에 마그네틱 바를 넣어준 뒤, 3차 증류수 500ml 가량을 넣는다.
2. 삼각 플라스크에 LB broth 25g 넣고 호일로 입구를 감싼 뒤, 교반기에서 LB broth가 녹을 때까지 mixing 한다.
3. LB broth가 다 녹으면 3차 증류수를 넣어 1L를 맞추어준다.
4. 3번의 LB media 500ml를 다른 bottle로 옮긴 후 7.5g의 agar를 넣어주고 autoclave를 수행한다.
(남은 500ml의 LB media는 추후 박테리아 배양에 사용한다.)
5. Autoclave가 끝난 LB agar media를 교반기에서 식혀준다.
(교반기에서 식혀야 agar에 의해 media가 굳지 않는다.)
6. LB agar media가 일정 부분 식으면 plasmid selection marker의 항생제를 넣어준다.
7. clean bench에서 6번의 LB agar media를 페트리디쉬에 0.5cm 정도의 두께로 부어준 뒤 굳힌다.
8. 굳은 LB agar media는 뒤집은 상태로 4℃에서 보관한다.
(뚜껑이 지면을 향하도록 하여 물방울로 인한 오염을 방지한다.)
* LB broth : Tryptone 10g / Yeast Extract 5g / NaCl 10g
LB Agar plate 만들기
LB agar plate
- Transformation 된 E.coli를 배양하여 single-colony를 얻기위함이다.
1. 1L 삼각 플라스크에 마그네틱 바를 넣어준 뒤, 3차 증류수 500ml 가량을 넣는다.
2. 삼각 플라스크에 LB broth 25g 넣고 호일로 입구를 감싼 뒤, 교반기에서 LB broth가 녹을 때까지 mixing 한다.
3. LB broth가 다 녹으면 3차 증류수를 넣어 1L를 맞추어준다.
4. 3번의 LB media 500ml를 다른 bottle로 옮긴 후 7.5g의 agar를 넣어주고 autoclave를 수행한다.
(남은 500ml의 LB media는 추후 박테리아 배양에 사용한다.)
5. Autoclave가 끝난 LB agar media를 교반기에서 식혀준다.
(교반기에서 식혀야 agar에 의해 media가 굳지 않는다.)
6. LB agar media가 일정 부분 식으면 plasmid selection marker의 항생제를 넣어준다.
7. clean bench에서 6번의 LB agar media를 페트리디쉬에 0.5cm 정도의 두께로 부어준 뒤 굳힌다.
8. 굳은 LB agar media는 뒤집은 상태로 4℃에서 보관한다.
(뚜껑이 지면을 향하도록 하여 물방울로 인한 오염을 방지한다.)
* LB broth : Tryptone 10g / Yeast Extract 5g / NaCl 10g
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