- 세포에 DNA or siRNA transfection를 통해 어떠한 유전자를 Overexpression(O/E) 또는 Knockdown(KD) 시키는 것을 말한다. Transfection에는 Electroporation을 이용한 물리적 방법과 Lipofectamine과 같은 reagent를 이용한 화학적 방법이 있다. 여기서는 화학적 방법을 이용한 Transfection을 설명한다. 다음 내용은 참고로 알아두면 좋다.
유전자를 세포에 주입하는 것을 Transfection이라 하며, 박테리아에 주입하는 것을 Transformation, 세포에 viral을 통해 주입하는 것을 Transduction이라 한다.
1. 사전에 7-80% confluency로 cell을 seeding 한다. (6well plate 기준)
2. DNA의 경우 Lipofectamine 3000, P3000을 각각 1:1:1 비율로 사용한다. (DNA 2ug)
siRNA의 경우 RNAi Max를 1:2 비율로 사용한다. (siRNA 20nM_final concentration)
3. Mix 된 sample을 각각 incubation 후 cell에 주입한다.
4. 이후 incubation을 수행한다. (DNA의 경우 24hr, siRNA의 경우 48hr)
위와 같은 원리로 Transfection이 이루어진다.
* 각 Lab마다 조건이 상이하여 명확한 protocol은 없다.
* 위 조건은 값비싼 Lipofectamine을 최대한 아끼기 위해 조건을 setting 한 것이다.
* 따라서 cell line마다 transfection이 될지 안 될지는 WB를 통해 확인해야 한다.
Transfection
Transfection
- 세포에 DNA or siRNA transfection를 통해 어떠한 유전자를 Overexpression(O/E) 또는 Knockdown(KD) 시키는 것을 말한다. Transfection에는 Electroporation을 이용한 물리적 방법과 Lipofectamine과 같은 reagent를 이용한 화학적 방법이 있다. 여기서는 화학적 방법을 이용한 Transfection을 설명한다. 다음 내용은 참고로 알아두면 좋다.
유전자를 세포에 주입하는 것을 Transfection이라 하며, 박테리아에 주입하는 것을 Transformation, 세포에 viral을 통해 주입하는 것을 Transduction이라 한다.
1. 사전에 7-80% confluency로 cell을 seeding 한다. (6well plate 기준)
2. DNA의 경우 Lipofectamine 3000, P3000을 각각 1:1:1 비율로 사용한다. (DNA 2ug)
siRNA의 경우 RNAi Max를 1:2 비율로 사용한다. (siRNA 20nM_final concentration)
3. Mix 된 sample을 각각 incubation 후 cell에 주입한다.
4. 이후 incubation을 수행한다. (DNA의 경우 24hr, siRNA의 경우 48hr)
* 각 Lab마다 조건이 상이하여 명확한 protocol은 없다.
* 위 조건은 값비싼 Lipofectamine을 최대한 아끼기 위해 조건을 setting 한 것이다.
* 따라서 cell line마다 transfection이 될지 안 될지는 WB를 통해 확인해야 한다.
* 20uM -> 20umol/L -> 20nmol/ml -> 20pmol/ul
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